{"created":"2023-06-20T13:21:02.312819+00:00","id":1131,"links":{},"metadata":{"_buckets":{"deposit":"78a2b80c-b76f-4c68-8e44-f4295244734f"},"_deposit":{"created_by":1,"id":"1131","owners":[1],"pid":{"revision_id":0,"type":"depid","value":"1131"},"status":"published"},"_oai":{"id":"oai:ir.soken.ac.jp:00001131","sets":["2:430:22"]},"author_link":["9410","9409","9408"],"item_1_creator_2":{"attribute_name":"著者名","attribute_type":"creator","attribute_value_mlt":[{"creatorNames":[{"creatorName":"海老原, 利枝"}],"nameIdentifiers":[{}]}]},"item_1_creator_3":{"attribute_name":"フリガナ","attribute_type":"creator","attribute_value_mlt":[{"creatorNames":[{"creatorName":"エビハラ, サトエ"}],"nameIdentifiers":[{}]}]},"item_1_date_granted_11":{"attribute_name":"学位授与年月日","attribute_value_mlt":[{"subitem_dategranted":"2003-03-24"}]},"item_1_degree_grantor_5":{"attribute_name":"学位授与機関","attribute_value_mlt":[{"subitem_degreegrantor":[{"subitem_degreegrantor_name":"総合研究大学院大学"}]}]},"item_1_degree_name_6":{"attribute_name":"学位名","attribute_value_mlt":[{"subitem_degreename":"博士（理学）"}]},"item_1_description_12":{"attribute_name":"要旨","attribute_value_mlt":[{"subitem_description":"　小胞型GABAトランスポーター（VGAT）とグルタミン酸脱炭酸酵素（GAD）は線虫からほ乳類に至る神経系でGABAニューロンに選択的に発現している。従って、これらの遺伝子発現機構が明らかになればGABAニューロンの分化過程が理解できるようになると考えた。VGATは最近発見された（McIntire et al., 1997;  Sagne et al., 1997）ので遺伝子構造や発現調節機構は調べられていない。そこでマウスVGAT遺伝子の構造および培養細胞中での発現を調べた。VGAT遺伝子は全長約4.7kbで、3個のエクソンと2個のイントロンから構成されていた。また、GADRT-PCR/southern blotting法を用いて既に同定されていた配列（VGATa）とC末端側のアミノ酸配列が異なるスプライシングアイソフォーム（VGATb）を同定した。主要な転写開始点は翻訳開始点から209bp上流だった。<br />　培養細胞においてVGAT遺伝子は、レチノイン酸（RA）で分化誘導したP19胚性腫瘍細胞で高レベル、未分化のP19細胞では低レベルの発現がみられ、Neuro-2a神経芽細胞では発現が認められなかった。プロモーター領域にはSp-1，Egr-1，Pitx等の転写調節領域が認められた。遺伝子の上流約2.0kbをルシフェラーゼ・レポーター遺伝子に連結し上記培養細胞に導入した結果、いずれの細胞でも同様の活性を示した。更に、遺伝子の上流約2.0kbから順次欠失させた変異体の解析により転写開始点より-161から+155までの領域が、プロモーター活性に最小限必要であることを明らかにした。ゲルシフトアッセイによって-49から-27の領域にSp-1に似た蛋白が結合することを示した。これらの配列がVGAT遺伝子の発現調節を行っていると考えられる。<br />　UNC-30ホメオドメイン蛋白はC. elegansでGABAニューロンの分化に必要な転写因子で、unc-25（GAD）とunc-47（VGAT）の発現を調節している。このことからほ乳類ではUNC-30のホモログであるPitx蛋白がGABAニューロンの分化に関与していると推測した。Pitx2a，Pitx2b，Pitx2c遺伝子の発現は、RA処理したP19細胞で同様に誘導された。更にPitx2aをRA処理したP19細胞に一過性に発現するとGAD67mRNAを発現した細胞とGABAを発現した細胞数が増えた。次に導入したPitx2a発現細胞とGABAニューロンの局在を抗体染色で調べると、発現した細胞は異なっていた。またPitx2aがVGATとGAD65遺伝子のプロモーターを活性化していることをレポーターアッセイで示した。これらの結果からPitx2aはRA処理したP19細胞中で間接的にGABAニューロンの分化を誘導している事が考えられた。<br />　今回の研究で、マウスVGAT遺伝子の構造を明らかにした。これによってVGATノックアウトマウスを作製し、生体内でのVGATの機能を調べることができる。また、VGAT遺伝子の転写調節機構を更に検討することにより、ほ乳類でのGABAニューロンの分化過程が明らかになることが予測される。","subitem_description_type":"Other"}]},"item_1_description_18":{"attribute_name":"フォーマット","attribute_value_mlt":[{"subitem_description":"application/pdf","subitem_description_type":"Other"}]},"item_1_description_7":{"attribute_name":"学位記番号","attribute_value_mlt":[{"subitem_description":"総研大甲第700号","subitem_description_type":"Other"}]},"item_1_select_14":{"attribute_name":"所蔵","attribute_value_mlt":[{"subitem_select_item":"有"}]},"item_1_select_8":{"attribute_name":"研究科","attribute_value_mlt":[{"subitem_select_item":"生命科学研究科"}]},"item_1_select_9":{"attribute_name":"専攻","attribute_value_mlt":[{"subitem_select_item":"20 生理科学専攻"}]},"item_1_text_10":{"attribute_name":"学位授与年度","attribute_value_mlt":[{"subitem_text_value":"2002"}]},"item_creator":{"attribute_name":"著者","attribute_type":"creator","attribute_value_mlt":[{"creatorNames":[{"creatorName":"EBIHARA, Satoe","creatorNameLang":"en"}],"nameIdentifiers":[{}]}]},"item_files":{"attribute_name":"ファイル情報","attribute_type":"file","attribute_value_mlt":[{"accessrole":"open_date","date":[{"dateType":"Available","dateValue":"2016-02-17"}],"displaytype":"simple","filename":"甲700_要旨.pdf","filesize":[{"value":"227.7 kB"}],"format":"application/pdf","licensetype":"license_11","mimetype":"application/pdf","url":{"label":"要旨・審査要旨 / Abstract, Screening Result","url":"https://ir.soken.ac.jp/record/1131/files/甲700_要旨.pdf"},"version_id":"689a508d-0921-4d0c-8d7b-54dd8ed4d459"},{"accessrole":"open_date","date":[{"dateType":"Available","dateValue":"2016-02-17"}],"displaytype":"simple","filename":"甲700_本文.pdf","filesize":[{"value":"943.7 kB"}],"format":"application/pdf","licensetype":"license_11","mimetype":"application/pdf","url":{"label":"本文","url":"https://ir.soken.ac.jp/record/1131/files/甲700_本文.pdf"},"version_id":"4b086ddb-a92e-4de5-a5f3-74d2af754f9b"}]},"item_language":{"attribute_name":"言語","attribute_value_mlt":[{"subitem_language":"eng"}]},"item_resource_type":{"attribute_name":"資源タイプ","attribute_value_mlt":[{"resourcetype":"thesis","resourceuri":"http://purl.org/coar/resource_type/c_46ec"}]},"item_title":"Vesicular GABA transporter and glutamate decarboxylase genes as targets for differentiation of GABAergic neuron:  genomic organization and transcriptional regulation","item_titles":{"attribute_name":"タイトル","attribute_value_mlt":[{"subitem_title":"Vesicular GABA transporter and glutamate decarboxylase genes as targets for differentiation of GABAergic neuron:  genomic organization and transcriptional regulation"},{"subitem_title":"Vesicular GABA transporter and glutamate decarboxylase genes as targets for differentiation of GABAergic neuron:  genomic organization and transcriptional regulation","subitem_title_language":"en"}]},"item_type_id":"1","owner":"1","path":["22"],"pubdate":{"attribute_name":"公開日","attribute_value":"2010-02-22"},"publish_date":"2010-02-22","publish_status":"0","recid":"1131","relation_version_is_last":true,"title":["Vesicular GABA transporter and glutamate decarboxylase genes as targets for differentiation of GABAergic neuron:  genomic organization and transcriptional regulation"],"weko_creator_id":"1","weko_shared_id":1},"updated":"2023-06-20T14:47:19.826231+00:00"}