@techreport{oai:ir.soken.ac.jp:00003241,
 author = {WATANABE, Masakatsu and 渡辺, 正勝},
 month = {2007-06, 2013-04-04},
 note = {15207006, application/pdf, 2003年度～2006年度, 研究代表者らが発見したミドリムシの光行動の光センサー、光活性化アデニル酸シクラーゼ(PAC)はフラビンを結合する光感受ドメインとcAMPを生成する酵素活性ドメインを持っていて青色光で活性化されるユニークなタンパク質であり世界的に注目されている(Iseki et al.2002 Nature)。光活性化アデニル酸シクラーゼの進化的起源に関する系統解析により、光活性化アデニル酸シクラーゼは二次共生による葉緑体獲得時あるいはそれ以降に出現したと推測された(Koumura et a1.2004 Photochem Photobiol Sci))。光活性化アデニル酸シクラーゼの光活性化に関する精製標品実験により、その光量依存性や数十ミリ秒オーダーのパルス光応答性を明らかにし、ミドリムシの光応答行動を説明するに足るものであることを示した(Yoshikawa et a1.2005 Photochem Photobiol Sci)。光活性化アデニル酸シクラーゼの光感受ドメインの光化学変化の速度論実験により、光感度・量子収率・暗回復半減期を解析した(Ito et al.2005 Photochem Photobiol Sci)。光活性化アデニル酸シクラーゼを細胞工学的に任意の細胞に導入し光条件を変えることで,細胞内のcAMP濃度を人為的に変化させ,各種の生命活動をコントロールする「細胞機能光スイッチ」として応用できることを実証するために、ドイツグループと共同研究を行い、その成果として、アフリカツメガエル卵母細胞やヒト培養細胞さらにはショウジョウバエ個体において機能をもった発現や行動の光制御の実現を世界で初めて報告した(Schroeder-Lang et al.2007 Nature Methods)。

Photoactivated adenylyl cyclase (PAC) (Iseki et al. 2002 Nature) is a blue-light sensor protein responsible for photoavoidance behavior in a eukaryotic unicellular flagellate alga Euglena gracilis. It is composed of flavin-binding, light sensing domains and adenylyl cyclase catalytic domains so that it produces cAMP, a versatile intracellular second messenger, in response to blue-light irradiation.

By molecular phylogenetic analyses of homologues fo PAC in various euglenoids, it was suggested that PAC was introduced into Euglena almost concomitantly with the secondary symbiotic introduction of its chroloplasts (Koumura et al. 2004 Photochem Photobiol Sci).

By analyses of the photoactivation kinetics of purified PAC from Euglena, action spectrum and responsively to repeated short pulse irradiations were determined as well as intracellular cAMP concentration time courses. These results were in accordance with the corresponding in vivo photobehavior characteristics (Yoshikawa et al. 2005 Photochem Photobiol Sci).

By analyses of the photochemical cycle kinetics of a flavin-binding domain heterologously expressed in E. coil, threshold light flounce rate, quantum efficiency as well as half life of dark recovery ware determined which were in general similarity to other members of the so-called BLUF family of flavin-binding domains, mostly of prokaryotic origins (Ito et al. 2005 Photochem Photobiol Sci).

The unique distinguishing feature of PAC to act as a light sensor having intrinsic effector function of adenylyl cyclase provide promising possibilities to be used as a tool to photomanipulate various cAMP-dependent biological functions including neural and reproductive processes if it is successfully expressed functionally in heterologous systems (Iseki et al. 2002 Nature). This possibility was in fact realized by successful functional expression of PAC in frog oocytes, human cultured cells as well as in fly brains, particularly in which grooming behavior of the fly individual was specifically photosuppressed by external light irradiation (Schroeder-Lang 2007 Nature Methods)., 40124226 | http://rns.nii.ac.jp/d/nr/1000040124226, 科学研究費補助金研究成果報告書 
研究代表者：渡辺正勝  ［総合研究大学院大学先導科学研究科教授］ 
研究分担者:：神取秀樹［名古屋工業大学工学研究科教授］},
 title = {新奇青色光センサー、光活性化アデニル酸シクラーゼの光活性化と細胞機能光制御の機構},
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